蛋白生物標志物已成為神經(jīng)科學研究的核心，尤其在神經(jīng)退行性疾病和神經(jīng)炎癥病癥的治療靶點開發(fā)方面。酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA) 作為蛋白生物標志物的主要檢測技術，雖具備良好的特異性和穩(wěn)健性，但傳統(tǒng)ELISA技術在實際應用中仍存在操作繁瑣、耗時長、重復性有限、樣本需求量大以及僅能單因子檢測等局限。鑒于此，ProteinSimple開發(fā)了全自動免疫分析平臺 Ella，集全自動化、快速、高靈敏、多因子分析能力于一體，讓生物標志物檢測更快！更準！更省心！

采用 Ella全自動免疫分析平臺定量檢測血漿和CSF中pTau-217的含量。結果表明，這種新型免疫檢測法可作為一種靈敏、精確、快速且易于使用的研究方法，用于檢測生物流體中的 pTau-217 蛋白。

01. 動態(tài)范圍和定量限

圖1. pTau-217卡盒標準曲線和動態(tài)范圍

在多個檢測卡盒及不同批次卡盒上運行曲線時，定量限(LOQ) 內(nèi)的所有點回收率均在80%-120% 之間，且變異系數(shù) (CV) 低于 20%。

通過對含有 pTau - 217的血漿樣本進行系列稀釋，樣本中抗原水平分別高于和低于定量下限 (LLOQ) 閾值，從而對定量下限進行進一步確認。結果顯示，在定量限范圍內(nèi)的所有樣本，回收率均在 80% 至 120% 之間，變異系數(shù) (CV) ≤20% 。

02. 檢測性能

(1) 精確度

圖3. pTau-217卡盒檢測精確度

左圖：將低濃度和高濃度的對照樣本在三個不同批次的Ella卡盒中重復檢測 (n=6) 。結果顯示，批間變異系數(shù)CV均 ≤5%，該檢測平臺的批內(nèi)精確度高。右圖：由多名操作人員使用2個批次多個檢測卡盒以及多臺Ella分析儀，對高濃度 (紅色) 和低濃度 (藍色) 的對照樣本進行制備和檢測。結果顯示，批間精確度高 (變異系數(shù) CV≤12%) 。

(2) 批次間一致性

圖4. pTau-217卡盒檢測批次間可重復性

通過在兩個獨立批次的卡盒上運行檢測濃度值在檢測范圍內(nèi)的不同樣本，來評估卡盒批次間的重現(xiàn)性。結果表明，通過Bland-Altman分析 (左圖) 和線性回歸分析 (右圖) ，不同批次卡盒的檢測濃度值具有可接受的等效性。

(3) 線性稀釋和摻入回收

圖5. 血漿和CSF樣本線性稀釋回收

所有血漿和腦脊液樣本均表現(xiàn)出良好的線性回收，平均回收率均在80%到120%之間 (血漿的平均回收率為100%，腦脊液的平均回收率為94%) 。

圖6. 血漿和CSF樣本摻入回收

準確性通過在血漿和腦脊液中進行摻入回收實驗評估，使用三種不同濃度 (高/中/低濃度) 的摻入分析物來評估。結果發(fā)現(xiàn)，添加了 EDTA 的血漿樣本回收率為89%，而腦脊液樣本的平均回收率為127%。

03. 臨床樣本檢測

圖7. pTau-217在健康供體和AD患者血漿和腦脊液中的檢測

血漿 (左側(cè)) 和腦脊液 (右側(cè)) 中的pTau-217水平在健康供體與臨床診斷的阿爾茨海默病患者之間進行了比較。與健康對照組及ATN陰性患者相比，ATN陽性患者 (ATN+) 在血漿和腦脊液中的pTau-217顯著升高。在比較ATN+和淀粉樣蛋白陽性 (A+) 患者組時，也發(fā)現(xiàn)了腦脊液pTau水平的顯著差異。統(tǒng)計分析使用了Kruskal-Wallis檢驗，隨后進行了Dunn’s多重比較事后檢驗。

04. 多平臺檢測一致性

圖8. Ella平臺與Simoa平臺平行評估血漿中pTau-217含量

圖9. 二種檢測平臺的相關性

上圖：使用 Simple Plex pTau - 217 ALZpath 檢測法與基于微珠的平臺 (Simoa pTau - 217 ALZpath 檢測法) 并行測量血漿 pTau - 217 含量比較。兩種平臺均顯示，在阿爾茨海默病 (AD) 患者樣本 (ATN 表型) 中，pTau - 217 水平顯著升高 (p < 0.001)。下圖：兩種平臺的相關性分析。

綜上結果表明，這種新型免疫檢測法Ella可作為一種靈敏、精確、快速且易于使用的研究方法，用于測量生物樣本中的pTau - 217蛋白含量。

Ella神經(jīng)退行性疾病的分析指標清單

更多指標可訪問：Neuroscience Assays for Ella | Bio-Techne

* 本文轉(zhuǎn)載自「ProteinSimple」微信公眾號

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